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微生物定量分析試薬キット

微生物定量分析試薬キット FISH-kitについて

BioVisible社(旧Ribo Technologies社)より開発された、腸内細菌を主体とした幅広い分野の細菌検出キットとして、FISHキットをご紹介いたします。

FISHキットは食中毒・プロバイオテクス・環境・人畜共通感染症等に関連する細菌の迅速診断キットです。

蛍光in situハイブリダイゼーション法（Fluorescence in situ Hybridization=FISH）を利用して、Gut flora（腸管内菌叢）を迅速に検出する同定・定量試薬キットです。ターゲットとなる菌種の16SrRNAに由来する特異的な塩基配列に、FITCまたはCY3により蛍光標識されたオリゴヌクレオチドプローブがハイブリダイズし、蛍光光学顕微鏡やフローサイトメータにより検出されます。

各構成

  • 腸内フローラ蛍光顕微鏡定量分析キット
  • 腸内フローラ蛍光顕微鏡同定分析キット
  • 腸内フローラフローサイトメトリーキット
  • 乳製品蛍光顕微鏡定量分析キット
  • 乳製品蛍光顕微鏡同定分析キット
  • 乳製品フローサイトメトリーキット
  • 血液サンプル蛍光顕微鏡同定分析キット：SepCheck
  • レジオネラ検出蛍光顕微鏡同定分析キット
  • テーラーメイドキット(要相談)

蛍光標識プローブ

FISHキットご利用の際、蛍光標識として使われるFITCまたはCY3は、ご利用いただくお客様の御使用目的でお選びいただける、カスタマイズの蛍光標識プローブです。
フローサイトメーター用キットにおいては、FITCまたはCY5のいずれかをお選びいただきます。

FITC標識蛍光ラベル使用
Escherichia coli <FITC標識蛍光ラベル使用>		 CY3標識蛍光ラベル使用
Escherichia coli <CY3標識蛍光ラベル使用>

測定器に制限は無く、適切な蛍光波長を備える測定装置であれば、測定機種を限定せずに測定が可能です。

FITC標識蛍光ラベル使用
 CY3標識蛍光ラベル使用
Klebsiella pneumoniae <Cy3ラベル使用>
測定装置：アロカ株式会社 CytoVision （Version 3.93）

 

迅速診断・形態観察

遺伝子定量分析ではPCR増幅させる定量分析が一般的ですが、FISH法ではPCR増幅を必要とせず、菌体を破壊せずに細胞を形態的に診断・観察することができます。
また培養法と比較して、培地に生育しにくい細菌もFISH法では遺伝子レベルで診断できるため、感度良く検出することができます。

バリデーションコントロール

多数の培養試験によって、構築されたデータを基に、バリデーションを行ったうえでの試験試薬キットですので、安心してお使いになれます。

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簡単なプロトコル

キットに添付されている操作手順書は、技術間の誤差を少なく結果を導くために考慮されており、簡単に操作して頂くことができます。

微生物定量分析試薬キット 測定手順微生物定量分析試薬キット ハイブリダイゼーション

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保存方法

キット内容であるHybridization mixtureに含まれるプローブは、遮光室温状態で6ヶ月間保存が可能です。
その他にも、一部の試薬を除き室温での保存が可能です。
キットに添付されているQuality Control Sheetに記載されている内容物の保存条件をご確認下さい。

試験工程の途中でサンプル保存が可能

FISH-kit™での試験は、試験工程の途中でサンプルを長期保存することが可能です。自社施設以外からのサンプル収集や他機関との共同研究など柔軟に対応できます。

※）詳しくは弊社までお問合わせ下さい。

乳製品アプリケーション

ミルク:
殺菌/無殺菌のサンプルにご利用いただけます。
ヨーグルト:
ヨーグルトでの分析も可能です。この場合、サンプルプレパレーションの段階で浄化と無菌構成成分の除去により、分析結果は異なります。

※)乳製品用FISH-kit™に添付されている手順書は、ミルクサンプル用に開発された工程に順じて作成された物です。
他の乳製品でのご利用をご希望の際は、弊社までお問合わせ下さい。

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製品リスト

→FISH-kit製品リスト(PDF形式)

FISH-kitTMシリーズ

商品コード 製品名 備考 試験材料 蛍光標識 蛍光標識
10-ME-H000-FITC FISH-kitAll bacteria 　 糞便 FITC Microscope
10-ME-H000-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-H000-CY5 Cy5 Microscope
10-ME-H001-FITC FISH-kit　Bifidobacterium spp. Genus 糞便 FITC Microscope
10-ME-H001-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-H001-CY5 Cy5 Microscope
10-ME-H002-FITC FISH-kit　Bacteroides fragilis Cluster 糞便 FITC Microscope
10-ME-H002-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-H003-FITC FISH-kit　Bacteroides distasonis Species 糞便 FITC Microscope
10-ME-H003-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-H004-FITC FISH-kit　Escherichia coli Species 糞便 FITC Microscope
10-ME-H004-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-H004-CY5 Cy5 Microscope
10-ME-H006-FITC FISH-kit　Lactobacillus cluster Cluster 糞便 FITC Microscope
10-ME-H006-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-H007-FITC FISH-kit　Streptococcus spp. Genus 糞便 FITC Microscope
10-ME-H007-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-H008-FITC FISH-kit　Bacteroides/Prevotella Group 糞便 FITC Microscope
10-ME-H008-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-H008-CY5 Cy5 Microscope
10-ME-H009-FITC FISH-kit　Clostridium butyricum Group 糞便 FITC Microscope
10-ME-H009-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-H010-FITC FISH-kit　Clostridium lituseburense Group 糞便 FITC Microscope
10-ME-H010-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-H011-FITC FISH-kit　Clostridium coccoides Group 糞便 FITC Microscope
10-ME-H011-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-H011-CY5 Cy5 Microscope
10-ME-H012-FITC FISH-kit　Bacteroides fragilis / distasonis Cluster 糞便 FITC Microscope
10-ME-H012-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-H013-FITC FISH-kit　Clostridium difficile Species 糞便 FITC Microscope
10-ME-H013-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-H014-CY3 FISH-kit　Enterococcus faecium Species 糞便 Cy3 Microscope
10-ME-H015-FITC FISH-kit　Enterococcus faecalis Species 糞便 FITC Microscope
10-ME-H016-FITC FISH-kit　Pediococcus acidilactici Species 糞便 FITC Microscope
10-ME-H017-FITC FISH-kit　Bifidobacterium animalis Species 糞便 FITC Microscope
10-ME-H018-FITC FISH-kit　Lactobacillus reuteri Species 糞便 FITC Microscope
10-ME-H019-CY3 FISH-kit　Klebsiella pneumoniae Species 糞便 Cy3 Microscope
10-ME-H020-FITC FISH-kit　Lactobacillus salivarius Species 食品 FITC Microscope
10-ME-H021-CY3 FISH-kit　Borrelia spp. Genus 血液 FITC Microscope
10-ME-H022-FITC FISH-kit　Coliforms Group 糞便 FITC Microscope
10-ME-H022-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-H022-CY5 Cy5 Microscope
10-ME-H023-FITC FISH-kit　Porphyromonas gingivalis Species オーラル FITC Microscope
10-ME-H023-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-H024-CY3 FISH-kit　Atopobium cluster Cluster 糞便 Cy3 Microscope
10-ME-H025-CY3 FISH-kit　Clostridium Cluster Ⅳ Cluster 糞便 Cy3 Microscope
10-ME-H025-CY5 Cy5 Microscope
10-ME-H026-CY3 FISH-kit　Campylobacter spp. Genus 糞便 Cy3 Microscope
10-ME-H027-CY3 FISH-kit　Campylobacter jejuni subsp. jejuni Subspecies 糞便 Cy3 Microscope
10-ME-H028-FITC FISH-kit　Eubacterium cylindroides Group 糞便 FITC Microscope
10-ME-H028-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-H029-CY3 FISH-kit　Faecalibacterium prausnitzii Group 糞便 Cy3 Microscope
10-ME-H030-CY3 FISH-kit　Candida albicans Species 糞便 Cy3 Microscope
10-ME-H031-CY3 FISH-kit　Enterobacteriaceae Species 糞便 Cy3 Microscope
10-ME-H032-CY3 FISH-kit　Clostridium perfringens Species 糞便 Cy3 Microscope
10-ME-H033-CY3 FISH-kit　Porphyromonas gulae Species 糞便 Cy3 Microscope
10-ME-H034-CY3 FISH-kit　Pseudomonas aeruginosa Species 糞便 Cy3 Microscope
10-ME-H035-CY3 FISH-kit　Lactobacillus casei/paracasei Species 糞便 Cy3 Microscope
10-ME-W001-FITC FISH-kit　Legionella spp. Genus FITC Microscope
10-ME-W002-CY3 FISH-kit　Legionella pneumophila Species Cy3 Microscope
10-ME-W003-FITC FISH-kit　Colony Legionella spp. Genus FITC Microscope
10-ME-W004-CY3 FISH-kit　Colony Legionella pneumophila Species Cy3 Microscope
10-ME-D001-FITC FISH-kit　Leuconostoc mesenteroides Species 乳製品 FITC Microscope
10-ME-D001-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-D002-FITC FISH-kit　Lactococcus lactis subsp. lactis Subspecies 乳製品 FITC Microscope
10-ME-D002-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-D003-FITC FISH-kit　Lactococcus lactis subsp. cremoris Subspecies 乳製品 FITC Microscope
10-ME-D003-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-D004-FITC FISH-kit　Lactobacillus cluster Cluster 乳製品 FITC Microscope
10-ME-D004-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-D005-FITC FISH-kit　Streptococcus thermophilus Species 乳製品 FITC Microscope
10-ME-D005-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-D006-FITC FISH-kit　Streptococcus spp. Genus 乳製品 FITC Microscope
10-ME-D006-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-D007-FITC FISH-kit　Lactococcus lactis Species 乳製品 FITC Microscope
10-ME-D007-CY3 Cy3 Microscope

特殊FISH-kit (2probes/kit)

商品コード 製品名 試験材料 蛍光標識 検出器
10-ME-H000/001 FISH-kit　All bacteria / Bifidobacterium spp. お問合せ下さい FITC, CY3 Microscope
10-ME-H000/002 FISH-kit　All bacteria / Bacteroides fragilis Microscope
10-ME-H000/004 FISH-kit　All bacteria / Escherichia coli Microscope
10-ME-H000/008 FISH-kit　All bacteria / Bacteroids Prevotella Microscope
10-ME-H000/011 FISH-kit　All bacteria / Clostridium coccoides Microscope
10-ME-H001/002 FISH-kit　Bifidobacterium spp. / Bacteroides fragilis Microscope
10-ME-H001/004 FISH-kit　Bifidobacterium spp. / Escherichia coli Microscope
10-ME-H001/023 FISH-kit　Bifidobacterium spp. / Porphyromonas gingivalis Microscope
10-ME-H002/004 FISH-kit　Bacteroides fragilis / Escherichia coli Microscope
10-ME-H007/023 FISH-kit　Streptococcus spp. / Porphyromonas gingivalis Microscope
10-ME-H031/001 FISH-kit　Enterobacteriaceae / Bifidobacterium spp. Microscope
10-ME-H032/008 FISH-kit　Clostridium perfringens / Bacteroides Prevotella Microscope

特殊FISH-kit (3probes/kit)

商品コード 製品名 試験材料 蛍光標識 検出器
10-ME-H001/023/000 FISH-kit　All bacteria / Bifidobacterium spp. / Porphyromonas gingivalis お問合せ下さい FITC, CY3,CY5 Microscope
10-ME-H000/001/002 FISH-kit　All bacteria / Bifidobacterium spp. / Bacteroides fragilis Microscope
10-ME-H000/001/004 FISH-kit　All bacteria / Bifidobacterium spp. / Escherichia coli Microscope
10-ME-H000/002/004 FISH-kit　All bacteria / Bacteroides fragilis / Escherichia coli Microscope

フローサイトメトリー用FISH-kitTM

商品コード 製品名 備考 試験材料 蛍光標識 検出器
10-FE-H000-CY5 FISH-kit　All bacteria   糞便 Cy5 Flowcytometry
10-FE-H001-FITC FISH-kit　Bifidobacterium spp. Genus 糞便 FITC Flowcytometry
10-FE-H001-CY3 Cy3 Flowcytometry
10-FE-H001-CY5 Cy5 Flowcytometry
10-FE-H004-FITC FISH-kit　Escherichia coli Species 糞便 FITC Flowcytometry
10-FE-H004-CY3 Cy3 Flowcytometry
10-FE-H004-CY5 Cy5 Flowcytometry
10-FE-H006-FITC FISH-kit　Lactobacillus spp. Genus 糞便 FITC Flowcytometry
10-FE-H006-CY3 Cy3 Flowcytometry
10-FE-H006-CY5 Cy5 Flowcytometry
10-FE-D005-FITC FISH-kit　Streptococcus thermophilus Species 乳製品 FITC Flowcytometry

SepCheckTMシリーズ

商品コード 製品名 試験材料 蛍光標識 検出器
10-ME-H004-FITC SepCheck　Escherichia coli 血液培養 FITC Microscope
10-ME-H004-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-H034-CY3 SepCheck　Pseudomonas aeruginosa 血液培養 Cy3 Microscope
10-ME-H031-CY3 SepCheck　Enterobacteriaceae 血液培養 Cy3 Microscope
10-ME-H007-FITC SepCheck　Streptococcus spp. 血液培養 FITC Microscope
10-ME-H007-CY3 Cy3 Microscope
10-ME-H015-CY3 SepCheck　Enterococcus faecalis 血液培養 Cy3 Microscope
10-ME-H014-CY3 SepCheck　Enterococcus faecium 血液培養 Cy3 Microscope
10-MC-B001-CY3 SepCheck　Staphylococcus aureus 血液培養 Cy3 Microscope
10-MC-B002-FITC SepCheck　Coagulase Negative Staphylococcus 血液培養 FITC Microscope
10-MC-B003 SepCheck　S.aureus(Cy3) / Coagulase Negative Staphylococcus (FITC) 血液培養 FITC Microscope

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カスタマイズサービス

お客様のニーズに合わせて、カスタマイズなキットをご提供致します。キットの企画・目的菌などの詳細を事前にご相談いたします。テーラーメイドに関しては、弊社までお問合わせ下さい。

FISH試験を有効に実施して頂くために、弊社ではカスタマイズなFISH製品のご紹介を差し上げます。製品リストに掲載された標準キットでの応用試験や、リスト掲載のないご希望の目的菌での試験用キット開発をご相談させて頂きます。

お客様のご希望の試験キットを事前にご相談させて頂きます。ご相談内容をメーカー研究所へ提案し、オーダーメイド製品を開発致します。

微生物定量分析試薬キット カスタマイズサービス

リスト製品の応用利用

リスト製品キットを標準プロトコルの一部をアレンジすることで、指定サンプル以外にもご利用頂けます。ご希望のサンプル情報をメーカーへと提出しメーカー側でプロトコルをアレンジします。また、お客様側からご提案されるプロトコル改訂についてもサポート致します。尚、実際のサンプル入手によるPrimary testを必要とする場合には、最低2ヶ月の試験期間及び試験費用を必要とする場合もあります。

リスト掲載外の目的菌に対するFISH-kitのご依頼

リスト掲載にない目的菌用のFISH-kitをご希望の場合、以下の項目を事前にご相談させて頂きます。

  • 目的菌(genus/species/subspecies)
  • サンプル材料の種類
  • 年間または月間の試験実施数
  • 必要検出感度
  • 試験の所要時間
  • 現在実施している試験法
  • サンプルのご提出について
  • 購入期限

尚、事前にご希望のプローブ用にシーケンスの御指定がある場合、御指定されたシーケンスでプローブをご用意することもできます

上記内容以外にも、ご質問及びご相談に応じながら製品を致します。
また、ご依頼内容によっては開発が困難な場合もございますのでご了承願います。

技術サポート

実際にご利用頂く場合に生じる疑問点やご質問に、Q&A形式でサポートいたします。 ご購入の際は、簡便に製品をお使いいただくために、トラブルシューティング 技術資料もご提出いたしております。

Q&A

Q: MEシリーズとMCシリーズの違いとは？
Ａ: MEシリーズは定量分析用キット、MCシリーズは定性分析用キットとなっております。定量分析は、フィルター濾過によりフィルター上に集められた細胞を10区画ほどカウントし、計算式を使って細菌数を測定する方式を取ります。定性分析は換算式を使いません。
Q: 蛍光標識(FITC / CY3)のどちらかを選んで検出するのか？
Ａ: ご注文の際、FITC(495nm/570nm)または、CY3(550nm/570nm)のどちらかの波長を選び頂きます。選択される波長は、お手持ちの顕微鏡に内蔵されているフィルター波長によるため、カスタマイズで蛍光標識されたプローブをご提供いたします。フローサイトメトリー用キットでの蛍光標識（FITCまたはCY5）においても同様です。
Q: FITCとCY3では、どちらが退色しやすいか？
Ａ: 一般的には両発色において差はないとされていますが、プローブの波長・マトリックス等にもよります。サンプルスライドの鏡検は、30分以内が好ましいとされていますが、2時間以内で蛍光が見られなくなったり、2週間以上蛍光を維持できたという例もあります。
Q: 蛍光色素の濃淡をどのようにカウントするか？
Ａ: (MicroScreen社のカウント定義)
  • ターゲットではないプローブが陰性となる場合、蛍光発色の強度に差があっても全てのシグナルをカウントします。
  • ターゲットでないプローブが何かシグナルを発している疑いのあるときは、まず最初に操作手順が間違っていることを疑います。
  • 操作の上で、ハイブリ後のwashingが最も重要でありこの工程で結合しなかった蛍光標識プローブを全て取り除きます
注）培地培養では、5-10%の死菌や弱った菌が含まれており、蛍光発色においても死菌では非常に弱い蛍光シグナルがあり、弱まった生菌であっても同じように弱いシグナルを放つ場合があります。
Q: フローサイトメーターの機種について
Ａ: 基本的に、特定波長の設定が可能であれば、どの機種のフローサイトメーターでも対応できます。
Q: フローサイトメトリ用のFISHキット取り扱いについて
Ａ: Bifidobacterium、E.coli、Lactobacillus用のキットを取り扱っており、蛍光標識にFITCまたはCY5をお選びいただけます。蛍光顕微鏡用キットと同様、キットに添付されている手順書及びQuality Control Sheetに従って取り扱っていただける、簡易キットとなります。
Q: 2キットをミックスして同時に使用することは可能か？
Ａ: ご注文の際、ご依頼いただきMicroScreen社側で2つのプローブを1キットとしてミックスすることは可能です（1プローブをFITC用、1プローブをCY3用）。しかし、プロトコールを正規の検出用に調整する必要があるため、お客様側で調整することはできません。
Q: キットに含まれていない、必要な機器は？
Ａ: 下記の器具はキット内容物に含まれておりません。予めご用意下さい。
  • 蛍光顕微鏡　：　ランプ（水銀・キセノン）100W フィルター（FITC: *495nm/520nm）(CY3: *550nm/570nm)　*excitation/emission
  • 遠心分離機　：　15,800G
  • ピペッター　：　10、100、1,000μl、5Ml用・ インキュベータ
  • 吸引濾過器・ ガラスビーズ（3mm）
  • エッペンドルフ
  • 滅菌水
  • ボルテックスミキサー
Q: 15,800G以外の遠心速度でも分析可能か？
Ａ: 低速度の遠心であれば、遠心時間を長くする必要があります。12,000Gが分析上利用できる最低速度です。この場合遠心時間を10分に設定します。15,800Gという高速度の利用は、操作時間を短縮するためです。
Q: 吸引濾過器のタイプについて
Ａ: ノンオイル型エアーポンプをご利用ください。
Q: ガラスビーズ（3mm）のサイズについて
Ａ: 開発時に使用されたビーズが3mmであり、他のサイズのビーズに関する検討はなされていません。他のサイズのビーズでの分析結果に関しては、保証できません。
Q: Tailor made FISH kit(テーラーメイド)について
Ａ: Tailor made FISH kitは、製品リストに掲載されていない目的菌に対応できるキットを、お客様のご要望で開発する製品です。お客様と事前にご相談しながらカスタマイズにFISHキットをご用意いたします。詳しくは、弊社（担当：営業2グループ菊池）までお問合わせ下さい。
Q: rpm表示の遠心器での使用は可能か？
Ａ: 製品のプロトコルで、低速度回転の遠心を必要とするステップがあります。この際の回転速度設定は、その後の手順に影響があるためできるだけ正しく設定する必要があります。そのため、プロトコルに記載された回転速度を設定できる遠心器のご利用をお薦めします。
Q: FISHキットの有効期限は？
Ａ: 各キットの有効期限は、6ヶ月です。キット内容物には、室温、室温遮光、冷蔵、冷凍（-20℃）と、試薬によって異なります。キットに添付されているQuality Control Sheetをご覧下さい。
Q: ハイブリダイゼーションに要する時間は？
Ａ: 各キットによってハイブリに要する時間は異なります。最短3時間程度のものから、最低16時間程度を要するものまであります。また、ハイブリ反応温度も目的菌によって異なります。キットに添付されている手順書（Protocol Sheet）をご覧下さい。
Q: キットには、何が添付されているか？
Ａ: キットには、各試薬のほかに、スライドガラス、メンブレンフィルターも含まれています。その他にも、Protocol、Quality Control Sheetが添付されており、技術資料としてトラブルシューティングノートをご用意いたします。
Q: どのタイプの乳製品に対応できるか？
Ａ: FISH-kit ™は殺菌・無殺菌のミルクサンプル用に開発されていますが、種類によってはその他の乳製品においてもご利用が可能です。その場合、キットに添付されている手順内容に変更内容が生じることもございます。詳しくは弊社までお問合わせ下さい。
Ａ: 試験工程の途中でサンプルを長期保存しておくことが可能です。抽出された細胞をハイブリダイゼーションの前のステップで、-20℃に保存しておくことができます。
Q: FISH試験中にサンプルを保存しておくことは可能か？
Q: SepCheckとは？
Ａ: FISH法を使って血液中の細菌を迅速に検出することができる試薬キットです。血液培養されたサンプルを使い、従来の培養同定法に比べ迅速に検出することができます。